Posted by on 19 kwietnia 2018

Panel C pokazuje barwienie immunofluorescencyjne transfekowanych komórek H295R różnymi konstruktami FLAG ARMC5 (niezmutowany konstrukt i dwa mutanty missense: p.R898W i p.L548P). Po 6 godzinach komórki eksprymujące konstrukty ARMC5 miały normalne cechy morfologiczne. Po 14 godzinach komórki eksprymujące niezmutowany konstrukt ARMC5 (białe strzałki) były apoptotyczne (koekspresja odszczepionej kaspazy 3 [zielone zabarwienie] i zmieniona morfologia komórek ze skondensowanymi jądrami) i komórki wyrażające konstrukty ARMC5 o nieporozumieniach (p.R898W i p.L548P) nie były apoptotyczne. Czerwone zabarwienie wykazuje przeciwciała FLAG (konstrukty ARMC5), a niebieskie zabarwienie pokazuje 4 , 6-diamidino-2-fenyloindol (DAPI) (jądro komórkowe). Badaliśmy rolę ARMC5 w steroidogenezie in vitro. Inaktywacja ARMC5 przez siRNA w komórkach H295R zmniejszone poziomy matrycowego RNA (mRNA) genów kodujących enzymy steroidogenne CYP17A1 i CYP21A2 oraz obniżone poziomy mRNA genu kodującego czynnik transkrypcyjny nadnerczy NR5A1 (zwany także czynnikiem steroidogennym 1) i receptora melanokortyny 2 MC2R ( Figura 4A). Przeciwnie, inaktywacja ARMC5 nie miała wpływu na poziom mRNA genu kodującego czynnik transkrypcyjny NR0B1 (DAX-1). Synteza kortyzolu była zmniejszona w komórkach H295R po inaktywacji ARMC5 (Figura 4B).
Następnie badaliśmy rolę ARMC5 w przeżyciu komórek. W doświadczeniach przejściowej transfekcji ekspresja niezmutowanego ARMC5 w komórkach H295R i HeLa spowodowała śmierć komórki. Żadne zdolne do życia transfekowane komórki nie zostały wykryte po 14 godzinach, co pokazano przez odbarwienie rozszczepionej kaspazy 3 i FLAG-ARMC5 (figura 4C i fig. S10 w dodatkowym dodatku). Ponadto apoptozę potwierdzono przez rozszczepienie dwóch markerów apoptozy: polimerazy poli (ADP-rybozy) i laminatu A i C (ryc. S11 w dodatkowym dodatku). W przeciwieństwie do tego efekt ten nie był obserwowany w przypadku dwóch mutacji zarodkowych pnia R.988W i p.L548P (Ryc.
Dyskusja
Wykrywanie mutacji ARMC5 u ponad połowy pacjentów z tej serii, którzy przeszli operację niezależnego od kortykotropiny makronodularnego przerostu kory nadnerczy, sugeruje częstą genetyczną przyczynę tego stanu. Połączone podejście genomowe wykazało, że zmiany genetyczne ARMC5 są zgodne z modelem dwóch trafień dla prawdopodobnego genu supresorowego guza. Rzeczywiście, pacjenci z mutacją inaktywującą ARMC5 linii germinalnej mieli specyficzne dla guzka wtórne mutacje somatyczne inaktywujące ARMC5. Występowanie różnych mutacji somatycznych w obrębie jednego nadnercza sugeruje poliklonalną nowotworzenie związane z predyspozycją wynikającą z mutacji pojedynczej linii płciowej. Konsekwentne występowanie mutacji ARMC5 w tych guzkach nadnerczy wyraźnie wskazuje na główną rolę inaktywacji ARMC5 w ich rozwoju.
Inaktywacja ARMC5 była związana z powolnym procesem odróżnicowania komórek kory nadnerczy i wzrostem obustronnych mas u pacjentów z makronodularnym przerostem kory nadnerczy niezależnym od kortykotropiny, wraz ze zmniejszoną ekspresją enzymów steroidogennych i MC2R oraz nieprawidłową produkcją kortyzolu; te wyniki są zgodne z wcześniejszymi badaniami profilu ekspresyjnego.25,26 U naszych pacjentów masa nadnerczy u pacjentów, u których ARMC5 była zmutowana, była 4 do 24 razy większa niż w prawidłowym nadnerczu.
[podobne: olejek makadamia, olejek arganowy, filtry do wody ]

Powiązane tematy z artykułem: filtry do wody olejek arganowy olejek makadamia

Posted by on 19 kwietnia 2018

Panel C pokazuje barwienie immunofluorescencyjne transfekowanych komórek H295R różnymi konstruktami FLAG ARMC5 (niezmutowany konstrukt i dwa mutanty missense: p.R898W i p.L548P). Po 6 godzinach komórki eksprymujące konstrukty ARMC5 miały normalne cechy morfologiczne. Po 14 godzinach komórki eksprymujące niezmutowany konstrukt ARMC5 (białe strzałki) były apoptotyczne (koekspresja odszczepionej kaspazy 3 [zielone zabarwienie] i zmieniona morfologia komórek ze skondensowanymi jądrami) i komórki wyrażające konstrukty ARMC5 o nieporozumieniach (p.R898W i p.L548P) nie były apoptotyczne. Czerwone zabarwienie wykazuje przeciwciała FLAG (konstrukty ARMC5), a niebieskie zabarwienie pokazuje 4 , 6-diamidino-2-fenyloindol (DAPI) (jądro komórkowe). Badaliśmy rolę ARMC5 w steroidogenezie in vitro. Inaktywacja ARMC5 przez siRNA w komórkach H295R zmniejszone poziomy matrycowego RNA (mRNA) genów kodujących enzymy steroidogenne CYP17A1 i CYP21A2 oraz obniżone poziomy mRNA genu kodującego czynnik transkrypcyjny nadnerczy NR5A1 (zwany także czynnikiem steroidogennym 1) i receptora melanokortyny 2 MC2R ( Figura 4A). Przeciwnie, inaktywacja ARMC5 nie miała wpływu na poziom mRNA genu kodującego czynnik transkrypcyjny NR0B1 (DAX-1). Synteza kortyzolu była zmniejszona w komórkach H295R po inaktywacji ARMC5 (Figura 4B).
Następnie badaliśmy rolę ARMC5 w przeżyciu komórek. W doświadczeniach przejściowej transfekcji ekspresja niezmutowanego ARMC5 w komórkach H295R i HeLa spowodowała śmierć komórki. Żadne zdolne do życia transfekowane komórki nie zostały wykryte po 14 godzinach, co pokazano przez odbarwienie rozszczepionej kaspazy 3 i FLAG-ARMC5 (figura 4C i fig. S10 w dodatkowym dodatku). Ponadto apoptozę potwierdzono przez rozszczepienie dwóch markerów apoptozy: polimerazy poli (ADP-rybozy) i laminatu A i C (ryc. S11 w dodatkowym dodatku). W przeciwieństwie do tego efekt ten nie był obserwowany w przypadku dwóch mutacji zarodkowych pnia R.988W i p.L548P (Ryc.
Dyskusja
Wykrywanie mutacji ARMC5 u ponad połowy pacjentów z tej serii, którzy przeszli operację niezależnego od kortykotropiny makronodularnego przerostu kory nadnerczy, sugeruje częstą genetyczną przyczynę tego stanu. Połączone podejście genomowe wykazało, że zmiany genetyczne ARMC5 są zgodne z modelem dwóch trafień dla prawdopodobnego genu supresorowego guza. Rzeczywiście, pacjenci z mutacją inaktywującą ARMC5 linii germinalnej mieli specyficzne dla guzka wtórne mutacje somatyczne inaktywujące ARMC5. Występowanie różnych mutacji somatycznych w obrębie jednego nadnercza sugeruje poliklonalną nowotworzenie związane z predyspozycją wynikającą z mutacji pojedynczej linii płciowej. Konsekwentne występowanie mutacji ARMC5 w tych guzkach nadnerczy wyraźnie wskazuje na główną rolę inaktywacji ARMC5 w ich rozwoju.
Inaktywacja ARMC5 była związana z powolnym procesem odróżnicowania komórek kory nadnerczy i wzrostem obustronnych mas u pacjentów z makronodularnym przerostem kory nadnerczy niezależnym od kortykotropiny, wraz ze zmniejszoną ekspresją enzymów steroidogennych i MC2R oraz nieprawidłową produkcją kortyzolu; te wyniki są zgodne z wcześniejszymi badaniami profilu ekspresyjnego.25,26 U naszych pacjentów masa nadnerczy u pacjentów, u których ARMC5 była zmutowana, była 4 do 24 razy większa niż w prawidłowym nadnerczu.
[podobne: olejek makadamia, olejek arganowy, filtry do wody ]

Powiązane tematy z artykułem: filtry do wody olejek arganowy olejek makadamia