Posted by on 8 lipca 2018

Zamiast tego, zarówno GFP-B7-1-ogon i GFP-talin-HN współstrącono z FLAG-.3.EC. Nie znaleziono wiązania z białkiem fuzyjnym GFP-sui (kontrola negatywna). Zbadaliśmy mechanizm rozerwania B7-1 aktywacji .1-integryny. Wiadomo, że cytoplazmatyczne białko talin wiąże się z ogonami cytoplazmatycznej .-integryny, zaburzając mostek solny między podjednostkami . i .10 i powodując aktywację integryny.6 Ponieważ B7-1 może również wiązać się z integryną .1, postawiliśmy hipotezę, że B7-1 może blokować aktywację .1-integryny przez konkurowanie z talinem o wiązanie .1-integryny. W endogennych badaniach koimmunoprecypitacji potwierdzono interakcję między taliną a integryną .1 w prawidłowych podocytach, ale nie w podocytach .3 – / -. Przeprowadziliśmy także badania koimmunoprecypitacji komórek HEK293 po ich transfekcji różnymi konstruktami talin, .1 i B7-1. Doświadczenia te ujawniły, że cytoplazmatyczny fragment B7-1 (ogon B7-1) wiąże się z cytoplazmatycznym ogonem integryny .1 pozbawionej domeny zewnątrzkomórkowej (.1.EC) kosztem talina (Figura 2B). Przeciwnie, B7-1 pozbawiony swojego ogniska cytoplazmatycznego (B7-1. Ogon) nie zakłócał wiązania. do talina (Figura 2B).
Jako ostateczny test, czy B7-1 konkuruje z talinem o wiązanie .1, przeprowadziliśmy badania rekonstrukcji in vitro z oczyszczonymi białkami rekombinowanymi (Figura 2C). W nieobecności B7-1 (FLAG-B7-1), talina (FLAG-talin-HN) wiązała się z oczyszczonym .1 (GST-.1.EC), ale nie z kontrolą GST (Figura 2C). W przeciwieństwie do tego dodanie B7-1 (FLAG-B7-1.EC) doprowadziło do wiązania B7-1 z oczyszczoną integryną .1 (GST-.1.EC) kosztem talinu (FLAG-talin-HN) w zależności od stężenia moda (Figura 2C). Potwierdziliśmy, że B7-1 specyficznie konkuruje z talinami o wiązanie z integryną .1, ale nie z integryną .3 (Figura 2D), zgodnie z naszymi obserwacjami w testach rozprzestrzeniania komórek (Ryc. Podsumowując, dane te wskazują, że B7-1 pośredniczy w uszkodzeniu podocytów i białkomoczu, przerywając wiązanie taliny z integryną .1, ale nie integryny .3 (ryc. S8A w dodatkowym dodatku) i że to zakłócenie można zablokować przez podawanie abataceptu (ryc. S8B w dodatkowym dodatku).
B7-1 Immunobarwienie w ludzkich próbkach nerkowych
Aby sprawdzić, czy podocyt B7-1 może służyć jako biomarker niektórych białkowych chorób nerek, zbadaliśmy jego ekspresję w próbkach biopsyjnych natywnych nerek od pacjentów z różnymi chorobami kłębuszkowymi oraz w próbkach biopsyjnych alloprzeszczepów nerkowych. Wyniki immunobarwienia według diagnozy, płci i wieku pacjenta, czasu od transplantacji (jeśli dotyczy) i poziomu białka przedstawiono w tabelach S1 i S2 w dodatkowym dodatku; reprezentatywne obrazy pokazano na ryc
[podobne: promazyna, kasetony świetlne, adapalen ]

Powiązane tematy z artykułem: adapalen kasetony świetlne promazyna

Posted by on 8 lipca 2018

Zamiast tego, zarówno GFP-B7-1-ogon i GFP-talin-HN współstrącono z FLAG-.3.EC. Nie znaleziono wiązania z białkiem fuzyjnym GFP-sui (kontrola negatywna). Zbadaliśmy mechanizm rozerwania B7-1 aktywacji .1-integryny. Wiadomo, że cytoplazmatyczne białko talin wiąże się z ogonami cytoplazmatycznej .-integryny, zaburzając mostek solny między podjednostkami . i .10 i powodując aktywację integryny.6 Ponieważ B7-1 może również wiązać się z integryną .1, postawiliśmy hipotezę, że B7-1 może blokować aktywację .1-integryny przez konkurowanie z talinem o wiązanie .1-integryny. W endogennych badaniach koimmunoprecypitacji potwierdzono interakcję między taliną a integryną .1 w prawidłowych podocytach, ale nie w podocytach .3 – / -. Przeprowadziliśmy także badania koimmunoprecypitacji komórek HEK293 po ich transfekcji różnymi konstruktami talin, .1 i B7-1. Doświadczenia te ujawniły, że cytoplazmatyczny fragment B7-1 (ogon B7-1) wiąże się z cytoplazmatycznym ogonem integryny .1 pozbawionej domeny zewnątrzkomórkowej (.1.EC) kosztem talina (Figura 2B). Przeciwnie, B7-1 pozbawiony swojego ogniska cytoplazmatycznego (B7-1. Ogon) nie zakłócał wiązania. do talina (Figura 2B).
Jako ostateczny test, czy B7-1 konkuruje z talinem o wiązanie .1, przeprowadziliśmy badania rekonstrukcji in vitro z oczyszczonymi białkami rekombinowanymi (Figura 2C). W nieobecności B7-1 (FLAG-B7-1), talina (FLAG-talin-HN) wiązała się z oczyszczonym .1 (GST-.1.EC), ale nie z kontrolą GST (Figura 2C). W przeciwieństwie do tego dodanie B7-1 (FLAG-B7-1.EC) doprowadziło do wiązania B7-1 z oczyszczoną integryną .1 (GST-.1.EC) kosztem talinu (FLAG-talin-HN) w zależności od stężenia moda (Figura 2C). Potwierdziliśmy, że B7-1 specyficznie konkuruje z talinami o wiązanie z integryną .1, ale nie z integryną .3 (Figura 2D), zgodnie z naszymi obserwacjami w testach rozprzestrzeniania komórek (Ryc. Podsumowując, dane te wskazują, że B7-1 pośredniczy w uszkodzeniu podocytów i białkomoczu, przerywając wiązanie taliny z integryną .1, ale nie integryny .3 (ryc. S8A w dodatkowym dodatku) i że to zakłócenie można zablokować przez podawanie abataceptu (ryc. S8B w dodatkowym dodatku).
B7-1 Immunobarwienie w ludzkich próbkach nerkowych
Aby sprawdzić, czy podocyt B7-1 może służyć jako biomarker niektórych białkowych chorób nerek, zbadaliśmy jego ekspresję w próbkach biopsyjnych natywnych nerek od pacjentów z różnymi chorobami kłębuszkowymi oraz w próbkach biopsyjnych alloprzeszczepów nerkowych. Wyniki immunobarwienia według diagnozy, płci i wieku pacjenta, czasu od transplantacji (jeśli dotyczy) i poziomu białka przedstawiono w tabelach S1 i S2 w dodatkowym dodatku; reprezentatywne obrazy pokazano na ryc
[podobne: promazyna, kasetony świetlne, adapalen ]

Powiązane tematy z artykułem: adapalen kasetony świetlne promazyna