Posted by on 11 września 2018

Analiza aktywacji .1-integryny w podocytach
Dodatek lipopolisacharydu do pożywki hodowlanej lub nadmierna ekspresja B7-1 spowodował prawie całkowitą utratę aktywacji .1-integryny6,7 bez wpływu na całkowite poziomy integryny .1 (ryc. S6A w Dodatku Aneks). Abatacept przywrócił aktywację .1-integryny w podocytach eksprymujących B7-1, nawet w obecności lipopolisacharydu (ryc. S6A w dodatku uzupełniającym). Nadekspresja konstruktu B7-1. Ogon lub wyciszanie genu B7-1 zachowanej aktywacji .1-integryny w obecności lipopolisacharydu (Fig. S6A i S6B w dodatkowym dodatku). Podobnie jak w przypadku leczenia abataceptem, wyciszanie genu B7-1 również przywróciło aktywację .1 w podocytach .3 – / – (ryc. S6C w dodatku uzupełniającym). W niezależnych eksperymentach z cytometrią przepływową potwierdziliśmy, że B7-1 blokuje aktywację .1-integryny w podocytach (ryc. S6D w dodatkowym dodatku).
Analiza splinowania komórek zależnych od integryny
B7-1 tłumiło rozprzestrzenianie się komórek zależnych od integryny .5.1, które zostało przywrócone przez abatacept (ryc. S7A, S7B i S7C w dodatkowym dodatku). Natomiast B7-1 nie wpływał na rozprzestrzenianie komórek zależne od integryny .3 (ryc. S7D, S7E i S7F w dodatkowym dodatku).
Podstawy molekularne efektów B7-1 w aktywacji .1-integryny
Figura 2. Figura 2. Zakłócenie wiązania talinu z integryną .1, ale nie z integryną .3, przez B7-1. Jak pokazano w Tablicy A, endogenna miednica koprecypituje z aktywowaną integryną. w prawidłowych podocytach, ale nie w podocytach. 3 – / .. Immunoprecypitacja (IP) z przeciwciałem anty-zielonego białka fluorescencyjnego (GFP) służyła jako kontrola negatywna. Dane wejściowe dotyczą ekstraktów białkowych, które służyły jako materiał wyjściowy, z którego endogenne białka ulegały immunoprecypitacji. Jak pokazano w Tablicy B, FLAG-B7-1 nie wiązało się z talinem (GFP-talin-HN, lewa ścieżka); HN oznacza domenę N-końcową głowy. Ogon GFP-B7-1, ale nie ogon GFP-B7-1A blokował oddziaływanie talina (GFP-talin-HN) z integryną .1 (FLAG-.1.EC) w kotransfekowanych komórkach HEK293. Zamiast tego, B7-1-ogon koprecypitował się z integryną .1. Jak pokazano na górze panelu C, unieruchomiona integryna .1 (GST-.1.EC), ale nie kontrola GST, wiąże się bezpośrednio z oczyszczoną taliną (FLAG-talin-HN). W obecności rosnących ilości FLAG-B7-1.EC, wiązanie talin-HN do GST-.1.EC stopniowo traciło, podczas gdy wiązanie B7-1 do integryny .1 można było wykryć. Jak pokazano na dole panelu C, analiza metodą elektroforezy sodowej siarczku dodecylu i poliakryloamidu barwionego Coomassie (SDS-PAGE) wykazała czystość rekombinowanych białek. Jak pokazano w Tablicy D, koekspresja ogona GFP-B7-1 nie blokowała oddziaływania talina (GFP-talin-HN) z integryną .3 (FLAG-.3.EC) w potrójnie transfekowanych komórkach HEK293.
[podobne: medyk rzeszów rejestracja online, tens przeciwwskazania, szajnochy przychodnia ]

Powiązane tematy z artykułem: medyk rzeszów rejestracja online szajnochy przychodnia tens przeciwwskazania

Posted by on 11 września 2018

Analiza aktywacji .1-integryny w podocytach
Dodatek lipopolisacharydu do pożywki hodowlanej lub nadmierna ekspresja B7-1 spowodował prawie całkowitą utratę aktywacji .1-integryny6,7 bez wpływu na całkowite poziomy integryny .1 (ryc. S6A w Dodatku Aneks). Abatacept przywrócił aktywację .1-integryny w podocytach eksprymujących B7-1, nawet w obecności lipopolisacharydu (ryc. S6A w dodatku uzupełniającym). Nadekspresja konstruktu B7-1. Ogon lub wyciszanie genu B7-1 zachowanej aktywacji .1-integryny w obecności lipopolisacharydu (Fig. S6A i S6B w dodatkowym dodatku). Podobnie jak w przypadku leczenia abataceptem, wyciszanie genu B7-1 również przywróciło aktywację .1 w podocytach .3 – / – (ryc. S6C w dodatku uzupełniającym). W niezależnych eksperymentach z cytometrią przepływową potwierdziliśmy, że B7-1 blokuje aktywację .1-integryny w podocytach (ryc. S6D w dodatkowym dodatku).
Analiza splinowania komórek zależnych od integryny
B7-1 tłumiło rozprzestrzenianie się komórek zależnych od integryny .5.1, które zostało przywrócone przez abatacept (ryc. S7A, S7B i S7C w dodatkowym dodatku). Natomiast B7-1 nie wpływał na rozprzestrzenianie komórek zależne od integryny .3 (ryc. S7D, S7E i S7F w dodatkowym dodatku).
Podstawy molekularne efektów B7-1 w aktywacji .1-integryny
Figura 2. Figura 2. Zakłócenie wiązania talinu z integryną .1, ale nie z integryną .3, przez B7-1. Jak pokazano w Tablicy A, endogenna miednica koprecypituje z aktywowaną integryną. w prawidłowych podocytach, ale nie w podocytach. 3 – / .. Immunoprecypitacja (IP) z przeciwciałem anty-zielonego białka fluorescencyjnego (GFP) służyła jako kontrola negatywna. Dane wejściowe dotyczą ekstraktów białkowych, które służyły jako materiał wyjściowy, z którego endogenne białka ulegały immunoprecypitacji. Jak pokazano w Tablicy B, FLAG-B7-1 nie wiązało się z talinem (GFP-talin-HN, lewa ścieżka); HN oznacza domenę N-końcową głowy. Ogon GFP-B7-1, ale nie ogon GFP-B7-1A blokował oddziaływanie talina (GFP-talin-HN) z integryną .1 (FLAG-.1.EC) w kotransfekowanych komórkach HEK293. Zamiast tego, B7-1-ogon koprecypitował się z integryną .1. Jak pokazano na górze panelu C, unieruchomiona integryna .1 (GST-.1.EC), ale nie kontrola GST, wiąże się bezpośrednio z oczyszczoną taliną (FLAG-talin-HN). W obecności rosnących ilości FLAG-B7-1.EC, wiązanie talin-HN do GST-.1.EC stopniowo traciło, podczas gdy wiązanie B7-1 do integryny .1 można było wykryć. Jak pokazano na dole panelu C, analiza metodą elektroforezy sodowej siarczku dodecylu i poliakryloamidu barwionego Coomassie (SDS-PAGE) wykazała czystość rekombinowanych białek. Jak pokazano w Tablicy D, koekspresja ogona GFP-B7-1 nie blokowała oddziaływania talina (GFP-talin-HN) z integryną .3 (FLAG-.3.EC) w potrójnie transfekowanych komórkach HEK293.
[podobne: medyk rzeszów rejestracja online, tens przeciwwskazania, szajnochy przychodnia ]

Powiązane tematy z artykułem: medyk rzeszów rejestracja online szajnochy przychodnia tens przeciwwskazania